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產(chǎn)品名稱 | 臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞；HUV-EC |
生長特性 | 貼壁生長 |
貨號 | EY-X63455 |
細(xì)胞名稱 臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞；HUV-EC
形態(tài)特性: 上皮細(xì)胞樣
生長特性: 貼壁生長
特征特性: 該細(xì)胞可用于血管內(nèi)皮修復(fù)損傷的研究。
培養(yǎng)條件: Medium200+LSGS
傳代方法:
傳代情況: P3
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測: 培養(yǎng)法（-）
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產(chǎn)品特點:
1、 使用方便:不需昂貴設(shè)備。
2、 可以處理各種細(xì)菌菌體，包括新鮮菌液和冰凍菌體。
3、 將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。
4、 采用溫和的中性裂解組分，保持蛋白活性。
5、 含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。
6、 紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。
7、 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。
8、 本試劑盒中不有EDTA，與金屬螯和層析等兼容。
培養(yǎng)操作步驟 ：
1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
操作流程：
1.1主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長至60%～70%融合時，用0.25%消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生的細(xì)胞，以0.25％消化成單細(xì)胞懸液，計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中，每兩小時隨機取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ，計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生的細(xì)胞用消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔，計數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計算平均值。
rpIL-2 (Cys146Ala), CF (20 UG)
考馬斯亮藍(lán)R250Erk3 Antibody-2-氟
考馬斯亮藍(lán)G250Pan-Cadherin Antibody
溴酚藍(lán)Pan-Cadherin Antibody1-芐基吡咯烷-羧酸酯
固藍(lán)BPhospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb (Sepharose® Bead Conjuga)2-甲硫基-嘧啶酮
化硝基四氮唑藍(lán)Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)硝酸鋱
甲藍(lán)OTri-Methyl-Histone H3 (Lys27) (C36B11) Rabbit mAb (PE Conjuga)2,6-二甲基溴
阿利新藍(lán)8GXPhospho-Tuberin/TSC2 (Ser664) (D3B9Z) Rabbit mAb2,二甲基溴
四氮唑藍(lán)；BTPan-Cadherin (28E12) Rabbit mAb2,二酚
噻唑藍(lán);MTTPan-Cadherin (28E12) Rabbit mAb5-甲基異惡唑
藍(lán)(水溶)Phospho-Stat3 (Tyr705) (D3A7) XP® Rabbit mAb (Sepharose® Bead Conjuga)5-巰基-1H-四氮唑-1-酸
紅Phospho-CASC5 (Thr943/Thr1155) (D8D4N) Rabbit mAb2-溴-1,3,5-三
亮藍(lán)Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)多庫脂鈉
索非那新琥珀酸鹽GEF-H1 (55B6) Rabbit mAb6-溴-2-萘甲酸
結(jié)晶紫F4/80 (BM8.1) Rat mAb (violetFluor™ 450 Conjuga)羥基-2-甲酸
結(jié)晶紫(進(jìn)口)His-Tag (27E8) Mouse mAb (Sepharose® Bead Conjuga)溴-2-氟甲
硝基四唑紫(INT)TNFRSF8/CD30 Antibody5-羥基喹啉
基紫Phospho-STING (Ser366) (D8K6H) Rabbit mAb氨基喹啉
酸性紫49Hoechst 33342膽固
皂黃DAPI1-基-1,2-二酮
橙黃G；酸性橙10DRAQ5®L-天冬酰一水物
喹啉黃DRAQ5®2'-甲氧基酮
橙黃ⅡCD40 (D8W3N) Rabbit mAb氨基喹啉
鹽酸吖啶黃Propidium Iodide (PI)/RNase Staining Solution羥基喹啉
柯衣定Phospho-SLP-76 (Ser376) (D7S1K) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)7-氨基喹啉
日落黃Jak2 (D2E12) XP® Rabbit mAb (Sepharose® Bead Conjuga)N-氨基-氮雜雙環(huán)[3.3.0]辛烷鹽酸鹽
酒石黃；檸檬黃；酸性黃 23Phospho-Met (Tyr1234/1235) (D26) XP® Rabbit mAb (Sepharose®Bead Conjuga)特戊
酸性黃17Phospho-p38 MAPK (Thr180/Tyr182) (3D7) Rabbit mAb (Biotinylad)2,6-萘二酚
5-TAMRA；5-羧基四甲基羅丹明琥珀酰亞脂Phospho-Stat3 (Tyr705) (D3A7) XP® Rabbit mAb (Biotinylad)2,7-二羥基萘
吉拉爾特試劑TPhospho-CREB (Ser133) (87G3) Rabbit mAb (Biotinylad)睪酮
鉭試劑NRF2 (D1Z9C) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)雙酮葡萄糖
左西孟旦Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control (Biotinylad)甲酸酯
鋅試劑Mouse (MOPC-21) mAb IgG1 Isotype Control (Biotinylad)鹽酸異
鉛試劑MMP-2 (D4M2N) Rabbit mAb2-巰基并咪唑
鎂試劑ISNARK/NUAK2 Antibody2-甲基環(huán)己
鎂試劑IICDK8 (G398) Antibody2-甲基環(huán)己酮
高鐵試劑CDK8 (G398) Antibody碳酸
-7 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%
rpIL-1a, CF (10 UG)細(xì)胞名稱: 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞；BALB/3T3cloneA31 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%
rpIL-1a (10 UG)細(xì)胞名稱: 小鼠巨噬細(xì)胞；Ana-1 RPMI1640(w/oHepes)胎牛血清，10%
rpIL-18, CF (25 UG)細(xì)胞名稱: 小鼠Mo-MuLv感染的3T3細(xì)胞；Mo-MuLV/3T3 RPMI1640(w/oHepes)胎牛血清，10%
rpIL-18 (25 UG)細(xì)胞名稱: 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞；NIH/3T3 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%
rpIL-12, CF (25 UG)細(xì)胞名稱: 小鼠SRSV轉(zhuǎn)化的3T3細(xì)胞；SRSV/3T3 RPMI1640(w/oHepes)胎牛血清，10%
rpIL-12 (25 UG)細(xì)胞名稱: 小鼠T淋巴細(xì)胞；CTLL-2[CTLL2] RPMI1640(w/oHepes)胎牛血清，10%；100U/mlrmIL-2
rpIL-10, CF (10 UG)細(xì)胞名稱: 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞；3T3-Swissalbino DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)胎牛血清，10%
rpIL-10 (10 UG)細(xì)胞名稱: 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞；3T3-L1 MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)牛血清，10%
rpIFN-g, CF (50 UG)細(xì)胞名稱: 小鼠皮下結(jié)締組織細(xì)胞；A-9 DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%
臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞；HUV-EC人喋呤(MTX)ELISA試劑盒LPAgELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人解脲脲原體抗體(UU-Ab)ELISA試劑盒LPLELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人吖啶橙(AO)ELISA試劑盒LPLELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人遲現(xiàn)抗原(VLA)ELISA試劑盒LPLELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人抗釀酒酵母抗體(ASCA)ELISA試劑盒LPOELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人抗髓磷脂抗體IgA(anti-myelinAb)ELISA試劑盒LPOELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人亮氨酰氨基肽酶(LAP)ELISA試劑盒Lp-PL-A2ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人磷葡萄糖變位酶(PGM)ELISA試劑盒Lp-PL-A2ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
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